衰老or老化
細胞衰老是指穩(wěn)定細胞周期停滯的狀態(tài)，在這種狀態(tài)下增殖細胞會對促生長刺激產生耐受，通常由 DNA 損傷所引起。Leonard Hayflick 首先描述了細胞衰老，他觀察到人類胎兒成纖維細胞最終會停止分裂，但在長時間培養(yǎng)后仍然具有活力和代謝活性?，F(xiàn)在普遍認為，除了具有干細胞樣特性的細胞類型外，只有轉化的惡性細胞會無限復制，而非轉化細胞則不會。除了在體外受控條件下發(fā)育的胚胎干細胞或誘導多能干細胞，此類細胞還包括內源性生殖干細胞和成體干細胞。衰老細胞與靜息細胞和終末分化細胞均不同，其中靜息細胞能夠重新進入細胞周期。
衰老細胞的特征是形態(tài)學和代謝變化、染色質重構、基因表達改變以及出現(xiàn)一種稱為衰老相關分泌表型 (SASP) 的促炎癥表型。衰老的生物學作用復雜，衰老細胞的保護作用和有害作用均已有描述，主要取決于生理環(huán)境。例如，盡管衰老可能作為避免受損細胞惡性轉化的機制進化而來，但衰老的發(fā)生可能會導致許多年齡相關病變，包括癌癥、組織退化和炎癥性疾病。
老化和細胞衰老這兩個術語不能互換使用。老化是隨時間推移的進行性衰退，而衰老在整個生命周期中都可發(fā)生，包括胚胎發(fā)生期間。衰老細胞的數(shù)量隨著年齡增大而增加，但衰老還在發(fā)育以及傷口愈合中發(fā)揮重要作用。
老化是什么
老化是生命發(fā)展的必然，任何細胞從誕生之時起，老化過程就開始了。老化的細胞結構蛋白、酶蛋白和受體蛋白合成減少，攝取營養(yǎng)和修復染色體損傷的能力均下降，表現(xiàn)為細胞和胞核變形，線粒體、高爾基體扭曲或呈囊泡狀，胞質色素沉著，細胞體積縮小，由此導致器官重量減輕，間質增生硬化，功能代謝降低，儲備功能不足。
肉眼顯微鏡下觀察細胞主要鏡下特征：
1、細胞內部會出現(xiàn)空泡（可能是凋亡小體），也可能會出現(xiàn)黑點，大多沿細胞周邊排布，內部中間也可能會顯現(xiàn)一些，但相對周邊為少。
2、老化以后的細胞會出現(xiàn)形態(tài)的改變，立體感會慢慢消失，開始成扁平狀，細胞與細胞之間的間隔減小或混在一起，細胞不再是梭形，而會成為各種不規(guī)則形狀。
3、細胞折光性變差，鏡下可見細胞“變薄”，做轉染實驗時，細胞死亡率會較高。但培養(yǎng)液不會發(fā)生迅速變黃的現(xiàn)象，仍清亮。
4、細胞的貼壁性減弱，開始有細胞漂浮于培養(yǎng)液中。
5、老化的細胞，表面分泌物會增多，細胞表面的純凈度越來越低。
6、分裂的細胞數(shù)量明顯地減少同時細胞的增殖速度也會大大下降。
7、細胞開始長角分化。
老化的原因
1、氧化應激：由內在或外在因素引起的氧化壓力會加速細胞老化。
2、端?？s短：端粒是染色體末端的保護結構，其縮短會導致細胞分裂次數(shù)有限，從而引發(fā)細胞老化。
3、細胞自噬功能降低：細胞自噬是細胞內部清理和修復機制的一部分，功能降低會導致細胞老化。
4、營養(yǎng)不足：培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分不足也會導致細胞老化。
5、傳代次數(shù)過多：在體外培養(yǎng)過程中，細胞傳代次數(shù)過多或時間過長也會引起細胞老化。
如何預防細胞老化
1、不要等細胞長得太滿才傳代。細胞太密會導致細胞狀態(tài)下降，產生細胞接觸性抑制。一般密度到80-90%左右就可以傳代了。
2、細胞不要消化過度。采用胰蛋白酶消化細胞，會造成細胞表面一定程度的細胞損傷。一定要注意選用的胰酶品牌，使用的胰酶量，絕大多數(shù)細胞使用0.25胰酶含edta這款消化液，t25瓶1ml，培養(yǎng)箱消化1min即可拿出來在顯微鏡下看細胞脫落情況。
3、最重要的是使用優(yōu)質的血清和培養(yǎng)基：干細胞對培養(yǎng)基中的內毒素非常敏感。除了要留意基礎培養(yǎng)基的內毒素外，也要留意血清的內毒素。如果血清中內毒素≥3EU/ml時，干細胞很容易老化或死亡，導致細胞“亞健康”狀態(tài)，導致實驗受到影響。很多使用者，在血清在試用前，就會通過提早審核該批次《檢測報告》，以決定是否入圍進行試用。
4、在開始養(yǎng)細胞并傳代時，也要特別注意凍存細胞，以保持細胞有種子庫存在，可以有效避免細胞損傷
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