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英文名稱：RAW 264.7

中文名稱：小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞

種 屬：鼠源

組織來源：Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；單核細(xì)胞；巨噬細(xì)胞。

生長特性：貼壁生長（胰酶會刺激分化）

細(xì)胞形態(tài)：不規(guī)則形

傳代比例：1:2 ~ 1:3

換液頻率：2~3次/周

倍增時間：12~30h

培養(yǎng)體系：DMEM(高糖）+10% Biochannel特級胎牛血清+1% P/S

培養(yǎng)條件：5%CO2 ；37℃

凍存條件：Biochannel 細(xì)胞凍存液，程序降溫，液氮長期保存。

培養(yǎng)建議：

（a）在細(xì)胞生長的初始階段，細(xì)胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有“偽足”延伸。隨著培養(yǎng)時間的增加，細(xì)胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長。細(xì)胞密度達(dá)到一定的程度，會有細(xì)胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中，鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)懸浮和貼壁的細(xì)胞會同時出現(xiàn)。

（b）該細(xì)胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時，用無菌細(xì)胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。

（c）該細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當(dāng)細(xì)胞密度較大時，細(xì)胞會輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆積在一起，有些細(xì)胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細(xì)胞是存活的，在傳代時應(yīng)收集起來，離心后細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。

（d）血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞貼壁能力變化，應(yīng)選用高質(zhì)量的胎牛血清。

（e）該細(xì)胞不建議使用胰酶消化，胰酶會刺激分化； 超過3天不傳代細(xì)胞容易分化；培養(yǎng)時，存在少量分化細(xì)胞，屬于正常現(xiàn)象。

（f）若需控制細(xì)胞的分化，RAW264.7使用吹打傳代，能更好地控制細(xì)胞分化率。

收貨事項：

（a）RAW 264.7 細(xì)胞貼壁較松，在包裝過程中切勿有劇烈的晃動。

（b）快遞運(yùn)輸路上受到顛簸，也可能會脫落。

（c）脫落的細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中不容易聚焦 。

收到貨后把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置兩個小時后觀察細(xì)胞，就可以看到了。如果靜置后看到的細(xì)胞仍偏少，請將瓶子里的培養(yǎng)基都轉(zhuǎn)移到離心管里，1200 rpm（約250g）離心3分鐘，即可看到沉淀的細(xì)胞。細(xì)胞全部脫落，慌亂之下可能會一個細(xì)胞都找不著。這個時候離心驗證是最好的方法，RAW 264.7脫落后傾向于抱團(tuán)，抱團(tuán)時細(xì)胞是活著的，但很難貼壁。記得一定要把聚成團(tuán)的細(xì)胞吹散成單細(xì)胞，不然細(xì)胞很難重新貼壁。

常見問題：

Q: 收貨時細(xì)胞出現(xiàn)偽足，或是碎片較多怎么辦？

A：受到運(yùn)輸影響，懸浮細(xì)胞會短暫性出現(xiàn)形態(tài)改變的現(xiàn)象，如偽足等。通過傳代培養(yǎng)，1周左右可以恢復(fù)正常。一些細(xì)胞在運(yùn)輸途中死亡而產(chǎn)生碎片，通過傳代離心可以去除。

Q：培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生貼壁怎么辦？

A: 少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當(dāng)貼壁細(xì)胞的比例高于20%，說明細(xì)胞生長環(huán)境有異常，需排查培養(yǎng)箱設(shè)置、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常。

Q：培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生聚團(tuán)怎么辦？

A：少量細(xì)胞聚團(tuán)，呈葡萄串狀，屬于正?，F(xiàn)象，特別是細(xì)胞密度較低時，易出現(xiàn)這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團(tuán)問題。不建議將聚團(tuán)的細(xì)胞吹散，等待密度高時，會自己分散開。

Q：培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇嗎？

A：β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補(bǔ)充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應(yīng)激對THP-1細(xì)胞的影響。當(dāng)細(xì)胞密度過大但需要維持時，可適當(dāng)增加巰基乙醇的比例（不超過標(biāo)準(zhǔn)量的1.5倍）。

Q：鏡下觀察時，難以聚焦或估算密度怎么辦？

A：懸浮細(xì)胞會隨著液體流動，不容易聚焦，靜置5-10min使細(xì)胞沉底，之后在輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細(xì)胞密度