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一、細(xì)胞概述

    RAW264.7中文全名為小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞，來(lái)源于雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤，是常用的炎癥細(xì)胞模型之一，常見(jiàn)于研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫、分子免疫學(xué)。

RAW 264.7 是一種單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞系，具有松散貼壁的立方形或紡錘形細(xì)胞和圓形活細(xì)胞。細(xì)胞松散附著、堆積并變圓是正常的，尤其是在培養(yǎng)密集時(shí)?；罴?xì)胞可以分離和漂浮，特別是當(dāng)培養(yǎng)物變得更加融合時(shí)。這些未附著的細(xì)胞仍然有活力，應(yīng)通過(guò)溫和離心保留下來(lái)，然后重新加入燒瓶中。不同批次血清的細(xì)微差異會(huì)導(dǎo)致 RAW 264.7 細(xì)胞或多或少的附著。我們使用未經(jīng)熱滅活的優(yōu)質(zhì)血清，因?yàn)闊釡缁羁梢詼p少附著因子和生長(zhǎng)因子。

二、細(xì)胞培養(yǎng)條件

三、細(xì)胞培養(yǎng)建議

1、細(xì)胞復(fù)蘇：將含有1m細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5ml培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液，補(bǔ)加4-6ml完全培養(yǎng)基吹勻。然后將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中過(guò)夜，第二天檢查細(xì)胞密度并換液。

2、細(xì)胞傳代：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

2.1棄去培養(yǎng)液上清，用不含鈣、鎂離子的PBS(BC-BPBS-01) 潤(rùn)洗細(xì)胞2次。

2.2加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-EDTA）BC-CE-005 于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，鏡下觀察細(xì)胞大部分圓縮并脫落，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶上部細(xì)胞呈掛線狀滑落，迅速拿回操作臺(tái)，于手心輕敲幾下培養(yǎng)瓶，可見(jiàn)細(xì)胞呈沙粒狀滑落，加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

2.3輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落分散后吸出，在1000RPM條件下離心3min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2ml吹勻。

2.4按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞重懸按1：2到1：4的比例分到新的培養(yǎng)瓶中。

3、細(xì)胞凍存

  凍存條件：20%FBS的培養(yǎng)基+10%DMSO（或使用細(xì)胞凍存液BC-CFM-01），2-8℃放置2小時(shí)，再將凍存管置于梯度降溫凍存盒并放于-80度過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮罐；